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将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1）在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2）用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3）倒置平板，于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4）用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5）用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6）裂解细菌，按本段下面所述方法，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。

染色体原位杂交实验的基本原理是利用特定标记的已知碱基序列的核酸探针，依据碱基互补配对原理，与中期染色体玻片标本中的同源 DNA 序列进行杂交。

标记可以用放1射性同位素（3H、35S、32P），然后进行放1射自显影；也可以用非放1射性的荧光素生物素、地1高辛，再用荧光显微镜进行观察，即荧光原位杂交（fluorescent in situhybridization，FISH）技术。

1、组织取材：组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快，所以新鲜组织和培养细胞在30 min 内固定。

2、细胞组织固定目的与注意事项：

（1）保持细胞结构；

（2）大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平；

（3）使探针易于进入细胞或组织。

常用的固定剂是多聚甲醛，与其它醛类固定剂不同，多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接，因而不会影响探针穿透入细胞或组织。